河南PCR實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)規(guī)范有哪些？
發(fā)布時(shí)間：2021-06-16 16:14
一、標(biāo)準(zhǔn)的三區(qū)分隔和氣壓調(diào)節(jié)
將PCR過程分成試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本制備和PCR擴(kuò)增檢測三個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)區(qū)，整個(gè)區(qū)域有一個(gè)整體緩沖走廊。每個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)區(qū)設(shè)置有緩沖區(qū)， 通過氣壓調(diào)節(jié)，使整個(gè)PCR實(shí)驗(yàn)過程中，試劑和標(biāo)本免受氣溶膠的污染并降低擴(kuò)增產(chǎn)物對(duì)人員和環(huán)境的污染。
PCR實(shí)驗(yàn)室可以是分散形式，也可以是組合形式。完成一組PCR實(shí)驗(yàn)，通常應(yīng)經(jīng)過試劑配制、樣品處理、核酸擴(kuò)增及產(chǎn)物分析四個(gè)實(shí)驗(yàn)過程，若實(shí)驗(yàn)工藝需要，還應(yīng)增加樣品粉碎過程。
進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室區(qū)域工作人員應(yīng)該按照以下路徑：
公共清潔區(qū)——更衣間（更換潔凈服）——緩沖間——污染實(shí)驗(yàn)區(qū)
工作人員退出實(shí)驗(yàn)室的路徑為：
污染實(shí)驗(yàn)區(qū)——緩沖間——淋浴間（有條件的可設(shè)置）——更衣間——公共清潔區(qū)
二、PCR氣流組織設(shè)計(jì)
1、原始試劑混配室應(yīng)為正壓間，在微環(huán)境百級(jí)超凈臺(tái)內(nèi)操作，須防止其它程序功能間對(duì)本操作間的污染。
2、DNA提取室應(yīng)為微負(fù)壓間，須設(shè)置排風(fēng)系統(tǒng)，以防止核酸提取時(shí)可能產(chǎn)生的氣溶膠對(duì)人員的侵害和對(duì)其它程序功能間的擴(kuò)散污染。
3、PCR擴(kuò)增室應(yīng)為微負(fù)壓間，須設(shè)置排風(fēng)系統(tǒng)，以防止大量擴(kuò)增產(chǎn)物對(duì)其它程序功能間的擴(kuò)散污染。
4、檢測室應(yīng)為微負(fù)壓間，須設(shè)置排風(fēng)系統(tǒng)，以防止擴(kuò)增產(chǎn)物在電泳測序過程中的擴(kuò)散污染。同時(shí)因3130分析儀散熱量較大，會(huì)提高室內(nèi)溫度3-5℃。
5、試劑混配室、DNA提取室、PCR擴(kuò)增室、檢測室如設(shè)置緩沖間，功能間內(nèi)可均為正壓，而在緩沖間內(nèi)設(shè)置負(fù)壓，氣流從其雙道門的門縫處分別向緩沖間內(nèi)流動(dòng)，用合理的氣流組織方式避免各功能間的交叉污染。
三、壓差設(shè)計(jì)
PCR實(shí)驗(yàn)室應(yīng)設(shè)計(jì)為負(fù)壓潔凈室，通過壓差控制，使整個(gè)PCR實(shí)驗(yàn)過程中試劑和標(biāo)本免受氣溶膠的污染，并且降低擴(kuò)增產(chǎn)物對(duì)人員和環(huán)境的污染。
各個(gè)實(shí)驗(yàn)室與非潔凈區(qū)之間的閘間保持正壓，＞10Pa，實(shí)驗(yàn)與閘間之間的氣流組織方向?yàn)椋涸噭?zhǔn)備區(qū)空氣流向閘間，標(biāo)本制備區(qū)流向閘間，而PCR擴(kuò)增區(qū)氣流方向由閘間流向PCR擴(kuò)增區(qū)，純化區(qū)同理。
同時(shí)按照試劑單向流方向，各個(gè)實(shí)驗(yàn)室之間設(shè)計(jì)不同壓力梯度來實(shí)現(xiàn)單向氣流組織方向，由試劑準(zhǔn)備區(qū)（+20Pa）、標(biāo)本制備區(qū)（+15Pa）、擴(kuò)增反應(yīng)一區(qū)（-5Pa）、純化區(qū)（-10Pa）、擴(kuò)增反應(yīng)二區(qū)（-20Pa）、到后純化區(qū)（-25Pa）壓力逐漸降低，形成單向負(fù)壓壓力梯度。
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