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河南PCR實驗室的防污染措施都有哪些?
發布時間:2021-07-28 16:00
  PCR實驗室又叫基因擴增實驗室。它能夠通過DNA基因追蹤系統來掌握患者體內的病毒含量。它最大特點是具有較大擴增能力與極高的靈敏性,但令人頭痛的問題是容易污染,極其微量的污染即可造成假陽性的產生。那么河南PCR實驗室的防污染措施都有哪些呢?
 
PCR實驗室
  
  1、PCR實驗室主要污染源
  
  (1)臨床樣本中存在的大量待測微生物。
  
  (2)科研中得到的質粒克隆。
  
  (3)以前分析研究的特定微生物。
  
  (4)大量存在于實驗環境中的特定微生物。
  
  (5)以前擴增產物的殘留污染。
  
  這也是PCR實驗室最容易產生的將造成假陽性的污染。PCR擴增可以引起實驗室中擴增產物的積累,通常,一次典型的PCR擴增可以產生10^9拷貝的靶序列,如果氣溶膠化,甚至最小的氣溶膠都會含有10^6拷貝的擴增產物。如果不加以控制,在短期內累積的氣溶膠化的擴增產物即會污染實驗室中的試劑、儀器設備和通風系統,從而造成嚴重的實驗室污染,出現大量的假陽性結果。一些RNA擴增技術如基于核酸序列的擴增(NASBA)、轉錄介導的擴增 (TMA)和Qbeta復制酶等不易產生擴增產物的污染,這是由于它們的擴增產物為RNA,可以被環境中的RNA酶迅速地降解。
  
  2、防污染措施
  
  (1)嚴格分區實驗室及嚴格遵守工作程序
 
PCR實驗室
  
  基因擴增實驗室分為試劑準備區、樣本準備區、PCR擴增區、產物分析區等,必需備有各自必需的儀器設備、工作服、手套、加樣器和通風系統。在每個區使用的試劑和廢物,必需直接在其各自的區域內分裝或包裝。操作人員必需注意防止通過他們的頭發、眼睛和衣服將擴增產物從污染區攜帶至清潔區的可能性。
  
  (2)化學清污
  
  實驗臺面可使用10%的次氯酸鈉(漂白劑)清洗,然后再用70%乙醇或清水洗去次氯酸鈉。次氯酸鈉具有氧化損傷核酸的作用,從而使可能留在實驗臺面 的擴增產物被破壞掉。要注意的是,次氯酸鈉不能區分提取的DNA和PCR擴增產物,用次氯酸鈉處理的樣本不能用于核酸擴增檢測。在實際工作中,有些物品比如放置擴增反應管的盤必需從污染區轉回清潔區時,在轉回之前,應將其置于2-10%的次氯酸鈉溶液中過夜,并充分沖洗。
  
  (3)擴增產物的修飾
  
  臨床PCR檢測通常由3或4個步驟組成:核酸提取和擴增檢測試劑的配制。使用商品試劑盒時,試劑的配制量可大大減少;樣本的處理即靶核酸的提取;PCR擴增;擴增產物的分析。使用實時熒光PCR方法,PCR擴增和擴增產物的分析同時完成。
  
  如對以前擴增產物進行適當修飾,應可以消除其污染后面新的擴增檢測,但為保證不影響靶核酸的擴增檢測,擴增產物修飾方法必需遵循兩個基本原則:一是擴增產物修飾后,應可以與隨后擴增的靶序列區分,這就要求區別性修飾在打開擴增反應管之前進行;二是修飾不能干擾正常的擴增檢測。
  
  擴增前修飾:UV照射、UNG酶處理。
  
  擴增后修飾:補骨脂素、異補骨脂素、鹽酸羥胺、引物水解法。
 
PCR實驗室
  
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