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PCR實驗室設計的標準規范都有哪些?
發布時間:2021-04-07 13:44
  PCR實驗室又叫基因擴增實驗室。它通過DNA基因追蹤系統,迅速掌握患者體內的病毒含量,其精確度高達納米級別。那么PCR實驗室設計的標準規范都有哪些呢?
 
PCR實驗室
  
  一、標準的三區分隔和氣壓調節
  
  將PCR過程分成試劑準備、標本制備和PCR擴增檢測三個獨立的實驗區,整個區域有一個整體緩沖走廊。每個獨立實驗區設置有緩沖區, 通過氣壓調節,使整個PCR實驗過程中,試劑和標本免受氣溶膠的污染并降低擴增產物對人員和環境的污染。
  
  PCR實驗室可以是分散形式,也可以是組合形式。完成一組PCR實驗,通常應經過試劑配制、樣品處理、核酸擴增及產物分析四個實驗過程,若實驗工藝需要,還應增加樣品粉碎過程。
  
  進入實驗室區域工作人員應該按照以下路徑:
  
  公共清潔區——更衣間(更換潔凈服)——緩沖間——污染實驗區
  
  工作人員退出實驗室的路徑為:
  
  污染實驗區——緩沖間——淋浴間(有條件的可設置)——更衣間——公共清潔區
 
PCR實驗室
  
  二、PCR氣流組織設計
  
  1、原始試劑混配室應為正壓間,在微環境百級超凈臺內操作,須防止其它程序功能間對本操作間的污染。
  
  2、DNA提取室應為微負壓間,須設置排風系統,以防止核酸提取時可能產生的氣溶膠對人員的侵害和對其它程序功能間的擴散污染。
  
  3、PCR擴增室應為微負壓間,須設置排風系統,以防止大量擴增產物對其它程序功能間的擴散污染。
  
  4、檢測室應為微負壓間,須設置排風系統,以防止擴增產物在電泳測序過程中的擴散污染。同時因3130分析儀散熱量較大,會提高室內溫度3-5℃。
  
  5、試劑混配室、DNA提取室、PCR擴增室、檢測室如設置緩沖間,功能間內可均為正壓,而在緩沖間內設置負壓,氣流從其雙道門的門縫處分別向緩沖間內流動,用合理的氣流組織方式避免各功能間的交叉污染。
 
PCR實驗室
  
  三、PCR實驗室壓差設計
  
  PCR實驗室應設計為負壓潔凈室,通過壓差控制,使整個PCR實驗過程中試劑和標本免受氣溶膠的污染,并且降低擴增產物對人員和環境的污染。
  
  各個實驗室與非潔凈區之間的閘間保持正壓,>10Pa,實驗與閘間之間的氣流組織方向為:試劑準備區空氣流向閘間,標本制備區流向閘間,而PCR擴增區氣流方向由閘間流向PCR擴增區,純化區同理。
  
  同時按照試劑單向流方向,各個實驗室之間設計不同壓力梯度來實現單向氣流組織方向,由試劑準備區(+20Pa)、標本制備區(+15Pa)、擴增反應一區(-5Pa)、純化區(-10Pa)、擴增反應二區(-20Pa)、到后純化區(-25Pa)壓力逐漸降低,形成單向負壓壓力梯度。
 
PCR實驗室
  
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